细胞成球实验

一、实验介绍

肿瘤干细胞是是一群既具有自我更新能力又具有较强的侵袭迁移的细胞，对肿瘤的存活、增殖、转移及复发有着重要作用。肿瘤细胞的成球实验（成球大小及数目）是衡量肿瘤细胞干性的金标准。成球能力是肿瘤干细胞体外鉴定的一个重要方法。其判断的是单个细胞在合适的条件培养基中自我更新的能力，对于某些肿瘤（如胶质瘤、乳腺癌）的肿瘤干细胞，其在体外条件培养时相对容易成球，而另一些上皮肿瘤（如肝癌、结肠癌等）则成球相对困难。是一种肿瘤体外培养系统，在无血清培养基中加入生长因子，培养肿瘤细胞，激发肿瘤悬浮聚集生长，是由肿瘤单个细胞在培养基中自发聚集而成的小细胞团块，或由单个细胞生长成的球型克隆。

二、实验目的

判断单个细胞在合适的条件培养基中自我更新的能力，和肿瘤细胞的增殖能力和细胞干性。 

三、实验结果展示

第一天         第二天

第五天          第六天

四、送样运输要求：

1 冻存细胞

冻存管寄送前，使用封口膜把冻存管口封严密，冻存管单独用自封袋存放。干冰运输。运输时间在2天以内干冰用量在10kg，在2-4天，干冰用量在20kg。

2 活细胞

(1) 使用T25瓶，瓶盖无孔。

(2) 生长状态良好的细胞，细胞密度在30%-40%为宜，寄送前，移去瓶内旧培养基，添加新培养基至瓶颈部，保留微量空气，拧紧瓶盖，并用封口膜密封，瓶身用75%表面消毒，把瓶用无菌袋或自封袋包装，然后放置在适当的盒内，盒周围用棉花等做防震防压处理。当温度低于10度是要加保温措施，如暖宝宝等。

(3) 细胞培养条件备注完整，如培养基，培养温度，FBS用量等。

(4) 备注：运送时间原则在4天以内，如细胞生长速度快，则加入的培养基血清可以减半，细胞密度在20%-30%。