双荧光素酶检测实验

一、实验介绍

通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异。

二、实验目的

1．检测基因靶向性；

2．检测启动子调控。 

三、实验结果展示

我司使用的双荧光素酶载体，以萤火虫荧光素酶为内参

四、送样运输要求：

1 冻存细胞

冻存管寄送前，使用封口膜把冻存管口封严密，冻存管单独用自封袋存放。干冰运输。运输时间在2天以内干冰用量在10kg，在2-4天，干冰用量在20kg。

2 活细胞

(1) 使用T25瓶，瓶盖无孔。

(2) 生长状态良好的细胞，细胞密度在30%-40%为宜，寄送前，移去瓶内旧培养基，添加新培养基至瓶颈部，保留微量空气，拧紧瓶盖，并用封口膜密封，瓶身用75%表面消毒，把瓶用无菌袋或自封袋包装，然后放置在适当的盒内，盒周围用棉花等做防震防压处理。当温度低于10度是要加保温措施，如暖宝宝等。

(3) 细胞培养条件备注完整，如培养基，培养温度，FBS用量等。

(4) 备注：运送时间原则在4天以内，如细胞生长速度快，则加入的培养基血清可以减半，细胞密度在20%-30%。