ELISA检测

一、实验介绍

酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

二、实验目的与原理

ELISA目的是检测血清、尿液、细胞上清等液体中特定的抗原，以达到定性判断的目的。

ELISA原理即将已知的抗原或者抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。示意图如下：

三、实验步骤

实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。

1. 将酶标板取出，分别设标准孔和样本孔，每个标准点依次各设两孔，每孔加入相应标准品50μL；待测样本孔中加入待测样本10μL，再加入样本稀释液40μL（样本稀释5倍）。（加样顺序及相应编号见excel表中相关内容！）

2. 弃去液体，将洗液工作液按350μL /每孔注入孔内，静置10s甩干，重复洗板5次，在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。

3. 每孔中加入检测抗体50μL（在使用前10分钟内配制），充分混匀，贴上不干胶封面，37℃温育30分钟。

4. 重复步骤2。

5. 每孔加显色剂A 50μL，显色剂B 50μL，振荡混匀后，37℃避光显色10分钟，每孔加终止液50μL。

6. 用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（OD值）。在反应终止后10分钟内检测。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

7. 实验完毕后，未使用完的试剂按规定保存温度放回冰箱保存。

四、实验结果展示

由于实验操作条件的不同，标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考，如下本实验室建立的标准曲线。

五、送样运输要求：

血清、血浆或其他液体样本：100μl检测一个指标；

未经分离处理的样本，例如全血1ml大约可分离100-200μl血清，但是必须根据客户实际送样情况而定，全血样本4℃保存送检，其余液体样本-20℃冻存送检。

组织：样本至少0.1g（黄豆大小），最后能匀浆分离上清液500μl左右，可检测5个指标，-20℃冻存送检。