鬼笔环肽染色实验

一、实验介绍

 鬼笔环肽(phalloidin)可特异性与细胞内聚合微丝中的丝状肌动蛋F-actin结合，通过藕联的荧光素分子，从而显示微丝骨架在细胞中的分布。与抗体相比，鬼笔环肽无物种限制，染色特异性极强，染色区和未染色区对比性非常清晰，而且标记后的肌动蛋白许多生理特性都得以维持。也适用于甲醛固定和去垢剂通透处理后的组织或细胞样本。

二、特点及适用范围

细胞学、生物学、病理学教学与科研。

三、细胞爬片鬼笔环肽染色实验步骤

1.  在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min；
2.  用4%的多聚甲醛固定爬片15min， PBS浸洗玻片3次，每次3min；
3.  滴加稀释好的鬼笔环肽染液（5μg/mL），37℃孵育1 h，PBST清洗3次，每次3 min；

4.  滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；

5.  用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察采集图像。

四、实验结果展示

五、送样运输要求：

　　按细胞准备流程4%的多聚甲醛固定固定细胞15min后用无菌PBS洗涤后用无菌PBS浸泡，离心管封口膜封好，4℃冰袋保存运输到实验室