透射电镜实验

一、概述：

    透射电镜(TEM)利用电子束作光源，用电磁场作透镜，经加速和聚集的电子束投射到非常薄的样品上，形成明暗不同的影像，是综合物理学和生物学相关领域重要的分析方法。透射电子显微镜相比光学显微镜具有较高分辨率，可达0.2nm，200-200k倍之间连续可调，用于观察样品的内部超微精细结构。

二、实验应用

TEM在细胞生物学、病毒学、病理学、材料科学等诸多领域具有广泛应用。可以用于观测动物植物细胞超微结构，如线粒体、内质网、高尔基体、溶酶体、叶绿体、液泡及细胞内生细菌等结构变化。观测病毒颗粒、外泌体、病原微生物、各类细菌真菌、纳米材料及纳米颗粒、晶体结构。

三、实验示例                   

线粒体                   自噬体

外泌体（负染）               内质网

四、送样运输要求：

①、组织样本：

1.组织固定，体积尽可能小，一般要求1mm³大小，如果容易漂浮的组织样本，在管口用棉花塞住保证组织浸泡于2.5%戊二醛中，组织太大固定不充分，容易造成照片模糊或者结构溶解。

2.组织取材要迅速干脆，在几分钟内保存于戊二醛，保持结构完整性。

3.组织在戊二醛中4℃保存1个月以内进行实验，不要存放太长时间。

4.部分组织需要在电镜时定位，需要加收定位费，常规组织定位如：肾脏观察肾小球变化，肺组织观察特殊的细胞结构，脑组织定位CA1、CA2、CA3结构等。

②、细胞样本：

样本在收集后一定要肉眼可见方可进行实验，一般要求细胞量10^6以上。

贴壁细胞：

弃去培养基，PBS洗涤3次，每孔加入1ml 2.5%戊二醛固定1-1.5h，固定完毕后，细胞刮轻柔的将细胞刮下，收集至1.5mL离心管内，取5ul在显微镜下观察细胞是否刮碎，如果细胞完整，则1000rpm离心5min收集细胞，加入1ml新鲜的2.5%戊二醛重悬置于4度避光保存，一般保存1周进行实验

悬浮细胞：细胞离心收集后，加1ml 2.5%戊二醛混匀固定，4度避光保存

③、微泡&外泌体：

客户需要将微泡&外泌体分离出来，2.5%戊二醛重悬固定，2.5%戊二醛的量不要太多100uL-200uL即可，保证微泡&外泌体的浓度便于观察寻找